Spesifik olmayan antikor bağlanmasını az altmak ve sonuç olarak arka plan sinyalini az altmak için, antikorlarla inkübasyondan önce bir bloke edici solüsyon kullanılması tavsiye edilir En etkili bloke edici solüsyon ikincil antikorun yetiştirildiği aynı türden serum içeren olabilir.
Arka plan lekelerini nasıl önlersiniz?
Doku bölümlerinin kalınlığını az altmak arka plandaki lekelenmeyi az altmaya yardımcı olabilir. Daha temiz IHC için daha ince bölümler kesmeyi deneyin. Kurutma yüksek oranda spesifik olmayan boyamaya neden olabileceğinden bölümlerin kurumasına izin vermemeye dikkat etmek de önemlidir.
İmmünofloresansı nasıl optimize edersiniz?
İmmünofloresan Mikroskopisi: Başarı için 10 Teknik İpucu
- Hücre sabitleme ve Geçirgenleştirme. …
- Antikor Özgüllüğü. …
- Uygun antikor seyreltmesini kullanma. …
- Tamponları ve Engelleme Aracılarını Optimize Etme. …
- Uygun Hücre Yoğunluğunu Kullanma. …
- Çoklu Boyama. …
- İkincil Antikorlar. …
- Arka Planı Az altma.
Arka planın lekelenmesine ne sebep olur?
Arka plan boyamaya uygunsuz antikor bağlanması veya doku lamı hazırlanırken yapılan hatalar neden olabilir.
İkincil antikorlar arka plan sinyallerini az altır mı?
F(ab) spesifik ikincil antikorlar, dokularda bulunan IgG proteinlerinin sekonder antikor tarafından spesifik olmayan bağlanmasını ortadan kaldırarak arka plan sinyalini az altmaya yardımcı olabilir.
